Lo sviluppo di nuovi metodi di analisi per le micotossine si è recentemente orientato verso un approccio multi-analita associato alla determinazione in spettrometria di massa. L’analisi dei biomarcatori, intesi come la tossina tal quale o i suoi metaboliti, rappresenta un campo di applicazione di interesse, in particolare quando la determinazione viene eseguita tramite la spettrometria di massa ad alta risoluzione. Il lavoro presenta lo sviluppo e la validazione di metodi per l’analisi in LC-HRMS di micotossine e loro metaboliti in campioni di urina e siero, nell’ambito di un progetto EFSA (BIODAF) sulla valutazione dell’esposizione professionale. In particolare, per le urine è stato testato un approccio dilute&shoot per l’analisi di AFB1, AFM1 e AFB1-N7-Guanina. I valori di LOD/LOQ sono stati successivamente abbassati includendo un passaggio di purificazione su colonnina di immunoaffinità. Il metodo per l’analisi dei sieri ha incluso l’AFB1, AFB1-Lisina e l’OTA. Durante il processo di validazione sono stati individuati il LOD e il LOQ, quest’ultimo è stato incluso nei livelli di concentrazione su cui è stata effettuata la validazione, inoltre la linearità è stata verificata nel campo di applicazione dei metodi. La giustezza e stata stimata, attraverso esperimenti di fortificazione, con il calcolo del recupero apparente. I valori ottenuti sono stati 101% e 98% per AFB1 and AFM1, nelle urine, e 55% e 61% per AFB1 e OTA, nel siero. La precisone è stata valutata attraverso il calcolo della deviazione standard relativa ottenuta dalle ripetizioni di analisi. I valori ottenuti sono stati 7% e 11% per AFB1 e AFM1, nelle urine, e 11% e 9% per AFB1 e OTA, nel siero. L’effetto sull’intensità del segnale dovuto alla presenza della matrice (SSE) è stato valutato tra l’ 82 e il 111% per le urine (metodo dilute&shoot) e tra l’82 e il 96% per AFB1 e OTA nel siero. I risultati ottenuti sono stati giudicati positivamente. Inoltre, l’utilizzo degli standard interni marcati per la quantificazione dei campioni rende questi metodi particolarmente idonei per la determinazione delle micotossine e dei loro metaboliti nei campioni di fluidi biologici caratterizzati da composizioni a volte anche molto diverse.
Determinazione di Aflatossina e Ocratossina A in fluidi biologici da LC-HRMS / Brera, C.; Debegnach, F.; Sonego, E.; Mazzilli, G.; Buiarelli, F.; De Santis, B.. - (2019). (Intervento presentato al convegno VI Congresso Nazionale Micotossine e Tossine Vegetali nella fi liera agro-alimentare tenutosi a Rome, Italy).
Determinazione di Aflatossina e Ocratossina A in fluidi biologici da LC-HRMS
Debegnach F.;Sonego E.;Mazzilli G.;Buiarelli F.;
2019
Abstract
Lo sviluppo di nuovi metodi di analisi per le micotossine si è recentemente orientato verso un approccio multi-analita associato alla determinazione in spettrometria di massa. L’analisi dei biomarcatori, intesi come la tossina tal quale o i suoi metaboliti, rappresenta un campo di applicazione di interesse, in particolare quando la determinazione viene eseguita tramite la spettrometria di massa ad alta risoluzione. Il lavoro presenta lo sviluppo e la validazione di metodi per l’analisi in LC-HRMS di micotossine e loro metaboliti in campioni di urina e siero, nell’ambito di un progetto EFSA (BIODAF) sulla valutazione dell’esposizione professionale. In particolare, per le urine è stato testato un approccio dilute&shoot per l’analisi di AFB1, AFM1 e AFB1-N7-Guanina. I valori di LOD/LOQ sono stati successivamente abbassati includendo un passaggio di purificazione su colonnina di immunoaffinità. Il metodo per l’analisi dei sieri ha incluso l’AFB1, AFB1-Lisina e l’OTA. Durante il processo di validazione sono stati individuati il LOD e il LOQ, quest’ultimo è stato incluso nei livelli di concentrazione su cui è stata effettuata la validazione, inoltre la linearità è stata verificata nel campo di applicazione dei metodi. La giustezza e stata stimata, attraverso esperimenti di fortificazione, con il calcolo del recupero apparente. I valori ottenuti sono stati 101% e 98% per AFB1 and AFM1, nelle urine, e 55% e 61% per AFB1 e OTA, nel siero. La precisone è stata valutata attraverso il calcolo della deviazione standard relativa ottenuta dalle ripetizioni di analisi. I valori ottenuti sono stati 7% e 11% per AFB1 e AFM1, nelle urine, e 11% e 9% per AFB1 e OTA, nel siero. L’effetto sull’intensità del segnale dovuto alla presenza della matrice (SSE) è stato valutato tra l’ 82 e il 111% per le urine (metodo dilute&shoot) e tra l’82 e il 96% per AFB1 e OTA nel siero. I risultati ottenuti sono stati giudicati positivamente. Inoltre, l’utilizzo degli standard interni marcati per la quantificazione dei campioni rende questi metodi particolarmente idonei per la determinazione delle micotossine e dei loro metaboliti nei campioni di fluidi biologici caratterizzati da composizioni a volte anche molto diverse.I documenti in IRIS sono protetti da copyright e tutti i diritti sono riservati, salvo diversa indicazione.
