Sfide e soluzioni analitiche nel rilevamento di oppioidi sintetici: approcci metabolomici in LC-HRMS/MS

L'analisi delle nuove sostanze psicoattive (NPS) rappresenta una sfida analitica complessa a causa della continua comparsa di nuovi analoghi e della loro capacità di eludere i test di screening tradizionali (Krotulski et al., 2025). Data la notevole numerosità di nuovi composti e delle classi chimiche, è essenziale integrare diverse metodologie analitiche per migliorarne l’identificazione, anche in assenza di standard analitici. Questo lavoro fa parte di un progetto dedicato allo studio degli effetti degli oppioidi sintetici attraverso l'analisi di campioni urinari murini mediante spettrometria di massa ad alta risoluzione (HRMS), risonanza magnetica nucleare (NMR) e spettroscopia Raman. In questo studio, è stata sviluppata una strategia di metabolomica untargeted per analizzare i cambiamenti nei metaboliti endogeni in seguito all’assunzione di brorfina e etonitazene. I campioni murini sono stati analizzati mediante LC-HRMS/MS utilizzando uno spettrometro di massa ad alta risoluzione, Orbitrap-Q-Exactive, dotato di sorgente elettrospray. Sono state combinate due tecniche cromatografiche: cromatografia in fase inversa (RP) e cromatografia a interazione idrofila (HILIC), sia in acquisizione positiva che negativa. Questa combinazione cromatografica ha permesso di ottenere una ampia copertura del metaboloma, mentre l'alta risoluzione dell’analizzatore di massa, integrata con una modalità Data Dependent Acquisition (DDA), e il successivo utilizzo di analisi multivariata (PLS-DA) e univariata (Volcano plot), ha permesso l’identificazione delle variazioni significative nei profili metabolici in risposta alla somministrazione delle sostanze. Identificando impronte metaboliche specifiche, è possibile ottenere informazioni sul meccanismo d'azione di tali sostanze, migliorandone le capacità di monitoraggio e supportando le indagini forensi in un contesto in continua evoluzione.