Metodo per la determinazione di mutazioni del gene della Fibrosi Cistica

La presente invenzione concerne un metodo di rivelazione di mutazioni del gene CFTR (“Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator”) della Fibrosi Cistica (FC) basato sulla tecnologia SNaPshot (Applied Biosystems), indicato di seguito anche come saggio CF-SNAP+20. Il saggio CF-SNAP+20 è stato ideato dagli autori dell’invenzione per indagare 20 mutazioni mediante amplificazione PCR di 7 esoni del gene CFTR, successivo minisequencing e analisi mediante elettroforesi capillare. Queste mutazioni si sono rivelate particolarmente frequenti nell’Italia Centrale, ma ben rappresentate anche nel resto d’Italia e in Europa. Il saggio CF-SNAP+20 è stato ideato per essere il complemento di un test commerciale noto (PCR/OLA/SCS: indagine delle 31 mutazioni del gene CFTR più frequenti nel mondo, Celera Diagnostics), anche nella versione aggiornata CF-OLA (indagine delle medesime 31 mutazioni + ulteriori 2, Abbott). Gli autori hanno individuato e selezionato particolari primers di PCR e di minisequencing, hanno messo a punto l’architettura complessiva del saggio (formato a 96-well e reazioni multiplex sia di PCR che di minisequencing), e hanno personalizzato la programmazione del software di analisi con la produzione di un insieme di regole volte ad identificare in maniera automatica le mutazioni eventualmente presenti nel campione. L’uso della stessa piattaforma strumentale ABI PRISM del test commerciale CF-OLA, dello stesso polimero e la complementarietà delle mutazioni incluse, rendono il saggio CF-SNAP+20 particolarmente interessante per quei laboratori che già utilizzano il test commerciale CF-OLA e in ogni caso per aumentare la sensibilità diagnostica dell’indagine mutazionale del CFTR.